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蛋白电泳

蛋白电泳样品的浓缩效应

1：凝胶孔径的不连续性：

浓缩胶为大孔胶；分离胶为小孔胶。在电场作用下，样品颗粒在

大孔胶中泳动的阻力小，移动速度快；当进入小孔胶时，受到的阻

力大，移动速度减慢。因而在两层凝胶交界处，样品迁移受阻而压

缩成很窄的区带。

2： 电位梯度的不连续性：

电泳开始后，快离子的快速移动会在其后形成一个离子强度很低 的低电导区，使局部电位梯度增加，电泳槽，将蛋白质浓缩成狭窄的区带

大多数蛋白质在pH6.7或8.3时均带负电荷，在电场中，都向正*移动。

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转印电泳（湿转）实验的操作

转印电泳湿转方式的操作介绍

湿转（一般是恒压转印，电泳槽多少钱，100V，时间2h左右）：转印缓冲液，三明治结构 ，底层海绵，往上依次是3-4层滤纸，凝胶，膜，3-4层滤纸，海绵

海绵和滤纸在使用前要用转移液浸泡，在制作三明治结构时一定要避免凝胶干燥，滤纸内的气泡要用玻璃棒赶走

膜在用之前都要活化，PVDF膜要先浸泡5S-30s，然后在转移缓冲液中平衡，目的是活化膜上的正电基团，NC膜直接在转移液中平衡即可

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蛋白质在SD*GE电泳中，迁移率只和其分子量相关

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PAGE据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，电泳槽报价，主要靠电荷及分子筛效应；不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，电泳槽公司，还具有浓缩效应，故分离效果更好。不连续的凝胶作为支持介质，利用凝胶层的不连续性、缓冲液离子的不连续性、PH的不连续性及电位梯度的不连续性，使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带，然后进行分离。

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